疫病防治
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牛流行热的诊断方法

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  根据流行热病的临床表现、流行病学特点可做出初步诊断。确诊需要实验室检查。本病的实验室检查方法主要有以下几种。

  1、病原学检查:可采取高热期病牛的血液加入抗凝剂,人工感染乳鼠或乳仓鼠并通过中和试验鉴定病毒。或将病死牛的脾、肝、肺等组织及人工感染乳鼠的脑组织制成超薄切片,电镜检查子弹状或圆锥形的病毒颗粒。也可取高热期病牛的血液或病料人工接种乳鼠后采取的含毒组织接种适宜的细胞培养物进行病毒分离,通过中和试验或免疫荧光试验进行病毒抗原的检查或鉴定。另外,由于荧光抗体技术简便、快速,除用于检查细胞培养物中的分离物外,还可将病牛肝、脾、肾、肺等脏器或细胞培养物制成涂片或压印片,用特异性荧光抗体染色和镜检。

  2、血清学检查:中和试验是将乳鼠脑组织或细胞培养物制成PBS悬浮液作为病毒抗原,其含毒量为200个/mILD50。待检血清经56℃30min灭活后,从1:5起进行2倍递进稀释,每一稀释度吸取1mL于试管内,另取一支试管加入1:5稀释的正常血清(60℃30min灭活)作为对照。然后各试管中加入等量的上述病毒悬浮液,充分混匀后置于37℃温箱内中和1h。每一稀释度脑内接种3~5只乳鼠。根据乳鼠死亡和存活数,计算出被检血清的50%中和效价。也可采用“双份血清”进行中和试验,如果血清抗体效价增加4倍或4倍以上即可做出诊断。

  补体结合试验是将样品接种于BHK-21细胞单层,置于37℃培养48~72h,待细胞病变达90%以上收毒。细胞毒液经反复冻融3次,加入2%灭活豚鼠血清,再冻融5次,以2000r/min离心10min,取其上清液测定效价合格,即制成细胞毒冻融抗原(V抗原)。对人工感染牛康复期血清阳性检出率达100%,自然感染急性病牛康复期血清阳性检出率为97.8%,并且具有较高的特异性。

  此外,也可用琼脂凝胶扩散试验检测。
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